基因芯片的測(cè)序原理
基因芯片又稱為DNA微陣列(DNA microarray),可分為三種主要類型:
1)固定在聚合物基片(尼龍膜,硝酸纖維膜等)表面上的核酸探針或cDNA片段,通常用同位素標(biāo)記的靶基因與其雜交,通過放射顯影技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是所需檢測(cè)設(shè)備與目前分子生物學(xué)所用的放射顯影技術(shù)相一致,相對(duì)比較成熟。但芯片上探針密度不高,樣品和試劑的需求量大,定量檢測(cè)存在較多問題 。
2)用點(diǎn)樣法固定在玻璃板上的DNA探針陣列,通過與熒光標(biāo)記的靶基因雜交進(jìn)行檢測(cè)。這種方法點(diǎn)陣密度可有較大的提高,各個(gè)探針在表面上的結(jié)合量也比較一致,但在標(biāo)準(zhǔn)化和批量化生產(chǎn)方面仍有不易克服的困難。
3)在玻璃等硬質(zhì)表面上直接合成的寡核苷酸探針陣列,與熒光標(biāo)記的靶基因雜交進(jìn)行檢測(cè)。該方法把微電子光刻技術(shù)與DNA化學(xué)合成技術(shù)相結(jié)合,可以使基因芯片的探針密度大大提高,減少試劑的用量,實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化和批量化大規(guī)模生產(chǎn),有著十分重要的發(fā)展?jié)摿Α?/span>
它是在基因探針的基礎(chǔ)上研制出的,所謂基因探針只是一段人工合成的堿基序列,在探針上連接一些基因芯片可檢測(cè)的物質(zhì),根據(jù)堿基互補(bǔ)的原理,利用基因探針到基因混合物中識(shí)別特定基因。它將大量探針分子固定于支持物上,然后與標(biāo)記的樣品進(jìn)行雜交,通過檢測(cè)雜交信號(hào)的強(qiáng)度及分布來進(jìn)行分析?;蛐酒ㄟ^應(yīng)用平面微細(xì)加工技術(shù)和超分子自組裝技術(shù),把大量分子檢測(cè)單元集成在一個(gè)微小的固體基片表面,可同時(shí)對(duì)大量的核酸和蛋白質(zhì)等生物分子實(shí)現(xiàn)高效、快速、低成本的檢測(cè)和分析。由于尚未形成主流技術(shù),生物芯片的形式非常多,以基質(zhì)材料分,有尼龍膜、玻璃片、塑料、硅膠晶片、微型磁珠等;以所檢測(cè)的生物信號(hào)種類分,有核酸、蛋白質(zhì)、生物組織碎片甚至完整的活細(xì)胞;按工作原理分類,有雜交型、合成型、連接型、親和識(shí)別型等。由于生物芯片概念是隨著人類基因組的發(fā)展一起建立起來的,所以至今為止生物信號(hào)平行分析最成功的形式是以一種尼龍膜為基質(zhì)的“cDNA陣列”,用于檢測(cè)生物樣品中基因表達(dá)譜的改變。
標(biāo)簽:  基因芯片 測(cè)序原理 基因芯片的測(cè)序
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