一、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的基本過(guò)程

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）是通過(guò)PCR儀，模擬DNA半保留復(fù)制，從而體外快速擴(kuò)增DNA的方式。

生物實(shí)驗(yàn)室要用到PCR的地方……簡(jiǎn)直數(shù)不勝數(shù)。比如擴(kuò)基因、檢測(cè)、吃螺師粉兒（什么鬼……）等等。

典型的PCR包括高溫變性、低溫退火、中溫延伸三個(gè)步驟，通過(guò)將這一套過(guò)程不斷循環(huán)，使DNA得以成百萬(wàn)倍的擴(kuò)增。

當(dāng)然這是典型的……不典型的PCR五花八門。

因此所謂的PCR儀，其實(shí)就是一套自動(dòng)溫控系統(tǒng)，早先人們做PCR都是用水浴鍋來(lái)做，指甲蓋大小的離心管，在三個(gè)鍋?zhàn)永飦?lái)回倒來(lái)倒去，拼個(gè)手速，攢個(gè)人品，好不熱鬧。

這么想想，其實(shí)現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室還是蠻幸福的。

高溫變性：所謂變性是95℃左右時(shí)DNA雙鏈打開(kāi)的過(guò)程，使之能夠與引物結(jié)合，為下面的反應(yīng)做準(zhǔn)備。但是注意考點(diǎn)：這里的DNA不只是我們加進(jìn)去的模板DNA，還包括擴(kuò)增出來(lái)的DNA，體系里但凡是雙鏈，高溫都能給他打開(kāi)了。這個(gè)過(guò)程大約需要5 min左右，再長(zhǎng)就煮熟了。

低溫退火：退火是個(gè)很親切的詞，這是我們做無(wú)機(jī)非金屬里面的概念，不知道是哪位巨巨給引入了生物學(xué)。所謂退火就是適宜條件下冷卻的過(guò)程，上面說(shuō)到DNA高溫變性，變性后的單鏈與引物通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)，再次形成局部雙鏈。更準(zhǔn)確的來(lái)講應(yīng)該叫復(fù)性，恢復(fù)雙鏈的過(guò)程。

中溫延伸：模板-引物接頭之后，對(duì)你沒(méi)看錯(cuò)，人家就叫接頭，濃濃的社會(huì)氣息。延伸就是在72℃、TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP為原料，以靶向序列為模板，堿基互補(bǔ)配對(duì)為原則，再次合成完整的雙鏈DNA的過(guò)程。我們可以看到這里復(fù)制之后實(shí)際上有一條鏈?zhǔn)切潞铣傻?，另一條則是原先就存在的，因此說(shuō)這叫半保留復(fù)制。

二、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的組成成分

1.模板（1 ng/μL）

模板DNA可以從各種生物組織中得到，通常濃度為1 ng/μL。濃度不是越高越好，濃度太高會(huì)導(dǎo)致大量的非特異性結(jié)合。

2.引物（10 μmol/L）

引物濃度通常是10 μmol/L。

引物濃度太低，產(chǎn)量較低；

引物濃度太高，引起錯(cuò)配、非特異性以及引物二聚體。

一般都是商用的合成好之后直接用就好。

聽(tīng)說(shuō)西雙版納植物園早先的時(shí)候訂個(gè)引物要花一個(gè)星期送到，也是十分艱苦了。

現(xiàn)在的公司一般次日達(dá)，甚至當(dāng)天給你送到，絕不會(huì)耽誤你的畢業(yè)。

上海生工貌似快要一統(tǒng)江湖了，給金維智打一波廣告……

3.Taq酶（5 U/μL）

U是酶活力單位，定義為：25℃下（其它為最適條件），1分鐘內(nèi)能轉(zhuǎn)化1 μmol底物的酶含量，或是轉(zhuǎn)化底物中1 μmol有關(guān)基團(tuán)的酶含量。

4.dNTP（2.5 mmol/L）

dNTP可與Mg²⁺結(jié)合，使游離的Mg²⁺濃度下降，從而影響DNA聚合酶的活性。

5.Buffer（含Mg²⁺）

Mg²⁺是DNA聚合酶的激活劑。

Mg²⁺濃度過(guò)低會(huì)使DNA聚合酶活性降低，PCR產(chǎn)量下降。

Mg²⁺濃度過(guò)高會(huì)使特異性降低。

三、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的體系

四、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的結(jié)果

瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)以大腸桿菌堿性磷酸酶（AKP）為例，進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，結(jié)果如下。

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